由于棉布经济实用, 棉布无菌包的使用目前在我国大多数医院仍居主导地位。但棉布无菌包的有效保存期受灭菌条件和存储环境等诸多因素影响。按《消毒供应中心管理规范》:温度低于25℃, 湿度低于60%的存放条件下, 无菌包保存期为10～14 d, 潮湿多雨季节为7 d[1], 超过保存期限的无菌包需要重新灭菌, 不管从工作量还是物品损耗等方面均导致医疗成本的增加。通过采取各种措施延长棉布类无菌包的有效保存期, 降低医疗成本是棉布无菌包使用的重要节点。无菌包干燥、外加保护罩、洁净度高、通风条件好的环境, 有利于延长其储存有效期[2,3,4]。本研究从无菌包的储存环境要求切入, 研究在提高环境洁净度和密闭性的条件下无菌包的有效保存期。1材料与方法1.1 材料无菌包 (相同规格的全新双层纯棉平纹细棉布无菌包布60块, 相同材料的全新棉布无菌巾60块) ;立式压力蒸汽灭菌器 (型号:L3-B50L) , 压力蒸汽灭菌指示粘带及121℃蒸汽压力化学指示卡, 洁净工作台 (洁净度1 000级) ;隔水式电热恒温培养箱 (型号:PYX-DHS-40×50S, 作细菌培养箱) ;2个生化培养箱 (作无菌包存储柜) ;紫外线灯;电子温湿度测试仪;成年家兔6只 (体质量2.5～3.0 kg) ;血培养皿, 无菌营养肉汤培养基;其他:剪刀、镊子、乙醇灯、接种环、无菌手套、灭菌琼脂、玻璃珠、50 ml注射器、无菌棉签、试管, 碘伏、75%乙醇、84消毒液、无菌脱脂棉球、无菌纱布、隔离衣、口罩。1.2 实验方法1.2.1 无菌包灭菌采用双层棉布制作的包布按常规进行打包, 松紧度合适, 每个包内置无菌巾1块, 中间放121℃压力蒸汽灭菌化学指示卡, 无菌包外贴压力蒸汽灭菌胶带以监测灭菌效果。灭菌时各包之间留2.5 cm空隙, 避开四壁和锅盖, 按常规灭菌程序进行灭菌。将2个生化培养箱编号为A、B, 灭菌后实验员戴无菌手套和口罩, 将60个无菌包随机平均分为A、B两组, 各组30个包, 分别存放于A、B生化培养箱各层。

      1.2.2 无菌包保存内环境控制生化培养箱放置橱柜离地面20 cm, 置于离墙壁5 cm的空间处。培养箱内先用清水擦洗, 再用84消毒液擦拭2次, 然后取无菌棉球蘸取75%乙醇擦拭消毒, 再用干燥的无菌纱布擦干, 放进已消毒的电子温湿度测试仪, 关闭柜门, 成封闭式, 预热至实验温度。将清洁消毒后的A、B生化培养箱的内环境湿度控制为35%～50%, A、B两箱温度分别调控至18～20℃、24～26℃, 并以此将无菌包分为A组 (18～20℃) 和B组 (24～26℃) 。每个培养箱内放置专用灭菌载物架, 分为5层备用。未采样标本时, 禁止打开生化培养箱柜门, 以减少内外环境空气对流, 保证生化培养箱形成一个相对密闭的环境。

     1.2.3 无菌包保存外环境控制生化培养箱放置间每日进行紫外线消毒2次。工作人员进出生化培养箱放置间更换隔离衣, 戴口罩。尽量减少人员进出走动。1.2.4 兔心脏采血及血平板制作采兔血前, 将三角烧瓶放入些许玻璃珠, 用塞子塞住并用牛皮纸包住灭菌备用。用三角烧瓶取营养琼脂200 ml灭菌溶化, 待冷至50℃左右备用。将成年家兔仰卧固定在手术台上, 剪去心脏部位被毛, 用碘伏消毒皮肤2次及采血者手, 在第三肋间胸骨左缘3 mm处, 选择心搏最明显处用50 ml注射器垂直刺入, 针尖刺入心脏后, 持针手可感觉到兔心脏有节律的跳动, 即有血液涌入注射器, 取20 ml血量后, 迅速将针头拔出, 立即将采好的兔血注入到装有玻璃珠的三角烧瓶内, 不断地摇动烧瓶10～20 min后, 在洁净工作台内边摇边倒入营养琼脂, 立即分装倾注于平板。待冷却后, 放入0℃的冰箱中保存备用。

    1.2.5 标本采样及监测分为2个阶段, 第一阶段于存包至第7天开始每隔5天取样, 即第12天、第17天、第22天、第27天;第二阶段每隔3天取样, 即第30天、第33天、第36天、第39天、第42天。实验员戴无菌手套和口罩, 每次分别从生化培养箱随机抽取3个无菌包, 按编号顺序在洁净工作台开包检验, 按无菌操作要求, 组员A打开实验包, 组员B用剪刀随机剪下包内无菌巾不同部位的1 cm×1 cm小布块4块, 由组员A用无菌镊夹取布块放入盛有无菌肉汤2 ml培养基的试管内。该试管由组员A将普通肉汤灭菌培养管及塞子在乙醇灯上消毒后再打开, 管口塞子再次在乙醇灯上消毒后盖上, 并进行编号。将试管放入35℃恒温箱内增菌, 48 h后转种血平板, 再置入37℃培养箱中培养24 h后观察有无细菌生长。