目的 研究动态条件下Ⅱ级生物安全柜操作台面不同部位细菌污染情况。方法 采用平板自然沉降法进行监测, 设无实验者操作动态组、有实验者操作动态组, 选取生物安全柜中5个监测点, 在开始测试后30、60 min时间段进行空气沉降菌监测。结果 在生物安全柜无实验操作的动态运行条件下, 靠近操作面区域的菌落总数随时间推移而增加, 靠近中部和内角区域的菌落总数随时间推移无显著增加。在生物安全柜有实验员进行正常操作的动态运行条件下, 靠近操作面区域和左侧内角污染物存放区域的菌落总数随时间推移而增加, 靠近中部和内角洁净物品存放区域的菌落总数随时间推移无显著增加。结论 为避免Ⅱ级生物安全柜中的环境污染样品, 要尽可能将实验操作部位设置在靠近生物安全柜内的中心区域。

随着人们对实验室生物安全意识的提高, 生物安全柜在疾病预防控制中心、医院及研究单位实验室的应用日益广泛, 在生物安全二级实验室, Ⅱ级A型生物安全柜的使用更加普遍。Ⅱ级生物安柜在设计上不但能保护操作者和环境, 而且也能保护工作台面的物品不受房间空气的污染〔1〕。在病原微生物实验室, 很多实验操作都需要在生物安全柜中完成, 有的病原微生物实验操作需要对样品进行保护, 防止样品交叉污染, 如对于病原微生物质控考核样品的制备、致病菌纯菌种培养和菌液制备、菌种保藏等实验活动都要注意避免生物安全柜中的环境污染样品或样品之间的的交叉污染。

1 材料与方法

1.1 试验材料

试验对象为荆门市疾病预防控制中心微生物实验室6台Ⅱ级A2型生物安全柜, 其中3台为赛默飞世尔 (中国) 有限公司生产, 3台为苏州净化设备有限公司生产。试验前对生物安全柜及实验室环境进行清洁和消毒处理, 按照YY 0569-2011《Ⅱ级生物安全柜》〔2〕方法对生物安全柜进行下降气流速度、流入气流速度、气流模式检测, 确认符合生物安全柜相应的物理技术标准要求。为保证柜内清洁物品和污染物品分区域放置, 所有测试用生物安全柜右侧设定为放置无菌或清洁物品, 左侧设定为放置污染物品, 主要实验操作位于生物安全柜操作台对角线交叉的中间区域。

1.2 试验

试验分组:无实验操作动态组设定, 即在无人员试验操作活动情况下, 生物安全柜正常开启30 min后, 打开操作面板玻璃到设定高度进行测试;有实验操作动态组设定, 在生物安全柜正常开启30 min后, 打开操作面板玻璃到设定高度, 实验人员进行常规细菌接种、核酸提取、菌种制备等试验操作活动的情况下进行测试。

1.3 采样点设置及检验

对生物安全柜4角及中央共设置5个监测点, 1号为左侧台面靠近进风口位置, 2号为右侧台面靠近进风口位置, 3号为安全柜台面中部对角线交叉点位置, 4号为左侧台面靠近内部位置 (同时为柜内污染物区域) , 5号为右侧台面靠近内部位置 (同时为柜内洁物存放区域) , 4角布置点距离边界10 cm, 且平皿边缘距通风格栅约2 cm。采用平板暴露沉降法进行监测〔3〕, 将营养琼脂平皿 (直径90 mm) 分别放置在采样点, 同时对生物安全柜所在实验室内空气沉降菌进行同步检测。在暴露时间30、60 min后盖上皿盖置36℃培养48 h, 计数菌落总数。

1.4 统计学方法

利用SPSS 13.0软件进行统计分析, 计数资料的比较利用卡方检验, 显著性水平α=0.05。