为了保证微生物检测数据的可靠性及准确性, 为卫生防疫工作提供可靠的依据, 做好实验室的消毒灭菌管理及其效果鉴定, 是实验室质量控制必不可少的一项工作。自1999年始对本科各室内的净化台、净化室的细菌及消毒室高压灭菌器的灭菌效果进行了定期检测, 结果如下。

1 材料与方法

1.1 材料

净化台:Y1-875型、W-CJ-1F型、净化台级别为100级、净化室级别为1000级。压力灭菌器:立式高压蒸气消毒器。

1.2 培养基

细菌菌落数检测用普通营养琼脂平板;高压灭菌器灭菌效果检测培养基用溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水。

1.3 指示菌

高压灭菌器灭菌效果检测指示菌用嗜热脂肪杆菌芽胞SSIK31, 含菌量为5×105～5×106 cfu/片。

1.4 细菌菌落数检测方法

于检测前50分钟开启紫外线灯, 开启30分钟后启动送风机20分钟, 将直径为9cm营养琼脂平板打开, 于操作台内左、中、右等距离处各放置1块, 暴露30分钟后放37℃培养箱培养48小时计数, 以3块平板上平均菌落数报告, 同时做营养琼脂平板的阴性对照。每月检测1次。

1.5 灭菌效果检测方法

于2个通气贮物盒内放满华氏管, 将盛有菌片的灭菌试管 (试管口用牛皮纸包封) 放于试管中心, 每盒放2支, 将贮物盒分别放于高压灭菌器底部及上层, 经1个灭菌周期后, 在无菌条件下取出通气贮物盒中的指示菌片管加入5ml溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水, 于56℃培养48小时观察培养基颜色的变化。每月检测1次。

1.6 结果的判定及评价

净化台、净化室的评价标准依据《消毒与灭菌实验技术规范 (1997试行) 》, 即100级净化台细菌颗料≤1.0 cfu/平皿, 1000级为≤3.0 cfu/平皿。高压灭菌器灭菌效果评价标准:同次检测中, 通气贮物盒内每个指示菌片接种的溴甲酚紫葡萄糖蛋白胨水培养基全部不变色为灭菌合格, 指示菌片之一接种的培养基由紫色变为黄色时, 判定为灭菌不合格。

2 结果

2.1 净化台检测

各室检测结果见附表。病原室净化台全年合格率为75%。由于净化台中紫外线灯管位于一侧, 测其强度时远离灯管处即低, 故于该处放置的平板上细菌菌落数要略高于中间和紫外灯最近处。病毒室净化台全年合格率分别为89%和83%, 其净化台前3个月细菌数略偏高是由于紫外线灯管强度不符合标准, 更换灯管后其合格率提高。环卫室净化台的合格率为78%, 其中7～8月高效滤膜损坏, 维修未做检测。食卫室净化室的全年合格率为75%。

2.2 灭菌效果检测

全年压力蒸气灭菌器检测除8月份有1支管由紫色变为黄色外, 其余均不变色即无菌生长, 合格率为92%。

3 讨论

3.1 净化工作台是提供局部洁净度, 使工作环境无菌无尘的一种空气净化设备, 其采用垂直层流的气流形式, 变速离心机将负压箱内经过预过滤器过滤后的空气压入静压箱, 再经高效过滤器进行二级过滤, 从高效过滤器出风面吹出的洁净气流以一定的和均匀的断面风速通过工作区时, 将尘埃粒子和生物颗粒带走, 从而形成无菌无尘的工作环境。影响净化工作台的洁净度因素较多, 应从以下几方面注意:

(1) 净化工作台周围应有一个洁净的外部环境, 最好放在具有缓冲间的无菌室内, 对外部环境随时灭菌处理。

(2) 应定期测量工作区的风速使工作台处于最佳状态, 同时定期拆洗预过滤器中的无纺布滤料或更换。

(3) 应采用透滤高的紫外线灯管, 以期得到较强的紫外线辐射能量, 实验前应开启足够时间, 并经常用纱布沾酒精或丙酮等擦拭紫外线灯管, 保持表面清洁, 否则影响杀菌能力。应定期检测紫外线强度, 一旦降到要求强度以下及时更换。

(4) 紫外线消毒受温度与湿度的影响, 其适宜温度为20℃～40℃。温度过高过低均会影响消毒的效果, 可适当延长消毒时间, 消毒环境的相对湿度应低于60%, 否则可延长照射时间。

3.2 压力蒸气灭菌的效果直接影响检测结果的准确性, 因此应注意以下几方面:

(1) 灭菌器内, 装放拟灭菌物品不应过挤, 其总体积不应超过其容积的80%, 物品装放时, 上下左右均应互相间隔一定距离以利于蒸汽与空气相互交换, 难于灭菌的大物品放上层, 较易灭菌的小物品放在下层。

(2) 灭菌前应对灭菌器各部位进行常规检查。

(3) 灭菌时应排净冷空气, 以使灭菌器内真正达到预定的温度。